PHÁT TRIỂN PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG 16 ACID AMIN TRONG CỦ KHOAI MỠ TÍM BẰNG HILIC–MS/MS

Tóm tắt

Nghiên cứu nhằm xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng 16 acid amin trong củ của loài khoai mỡ tím (Dioscorea alata L.) bằng kỹ thuật sắc ký lỏng tương tác thân nước ghép nối khối phổ hai lần (HILIC–MS/MS). Nguyên lý của phương pháp dựa trên quá trình thủy phân mẫu với acid mạnh, sau đó được chuyển về pH trung tính rồi thực hiện phân tích trên hệ thống LC-MS/MS. Quá trình thủy phân được khảo sát theo các yếu tố: dung dịch thủy phân, thời gian và khối lượng mẫu. Hệ thống LC–MS/MS sử dụng nguồn ion hóa phun điện tử (ESI+), chế độ MRM, cột tách Waters Acquity BEH HILIC, pha động là dung dịch đệm amoni format 20 mM pH 3,0 trong ACN/H₂O theo chương trình gradient. Phương pháp được thẩm định theo AOAC và tiêu chuẩn EC 2021/808. Kết quả cho thấy phương pháp có tính đặc hiệu cao, khoảng tuyến tính rộng với hệ số tương quan R² > 0,995, độ đúng, độ chính xác đảm bảo, độ nhạy phù hợp với LOD từ 1,12 – 2,83 mg/100 g, LOQ từ 3,36 – 8,49 mg/100 g. Phương pháp được áp dụng thành công để xác định hàm lượng acid amin trong 12 mẫu khoai mỡ tím được thu thập tại các tỉnh trong cả nước. Kết quả cho thấy hàm lượng trung bình của các acid amin tính trên chất khô dao động trong khoảng từ 120 mg/100 g (methionin) đến 1756 mg/100 g (acid glutamic).